一、制备显微标本的切片法

一石蜡包埋切片制作法

这是常用的切片法。以石蜡作为组织的填充支持介质，将整块组织加以包埋，凝固成均匀一致的固态结构。用切片机制取薄的切片。为了让石蜡能浸入组织内部，需将组织经过脱水等处理。过程大致如下：

⑴固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶。因此，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供保存的标本都需经固定处理。

常用的固定剂是甲醛、乙醇等，能使蛋白质凝固。还有由几种试剂配成的固定液，例如Carnoy固定液，由无水酒精、冰醋酸配成，固定力更快更强，不含水分，可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。

⑵脱水：是将组织细胞所含水分除去。通常用乙醇（Alcohol，酒精），此过程还使组织块进一步硬化。

⑶透明：是用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的溶剂，将组织中的酒精取代，以便石蜡浸入。通常用二甲苯（xylene）为透明剂。

⑷浸蜡：在温箱内进行。已透明的组织块放入加热融解的石蜡中，让石蜡浸透组织，作为支持介质。

⑸包埋：将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中，迅速冷凝，组织决便被蜡包埋。

⑹切片：用切片机。常用的切片机有轮转式、平推式的。用轮转式的易于切出连续切片。切片厚度随制片目的而调整。教学标本厚度多是5~6μm。

⑺贴片烤干：石蜡切片在温水上展平后，移在玻片上，烤干，即可供染色处理。染色后用树胶、盖坡片封固，可保存。

二冷冻切片法

冷冻切片法是借组织在低温下，冻结变硬而达到符合切片要求。冷冻切片法需有冷冻切片机，或在普通切片上配制冷设施。恒冷切片机是冷冻切片设备。它有一个恒冷箱，标本致冷台和切片机都装在箱内。恒冷箱的作用类似冰箱，可在一定范围内调整温度，其结构有利于保持箱内恒定低温，减少箱门打开时环境温度的干扰。切片机的轮转把手装在箱外，便于操纵切片。

冷冻切片法的优点是：在处理得当时，它可以保持组织的新鲜状态。并且，由于不需经脱水、透明、浸蜡等过程中溶剂的处理，及湿箱浸蜡热的影响，甚至可不经固定。所以能很好地保存组织细胞的各种成分，因此在酶的组织化学研究中常用此切片法。

二、显示标本结构成分的染色法

一苏木素伊红染色法（HE染色法）

为常用的染色法。该法应用于各种组织的染色，是组织学技术的基本方法，对任何液体固定的组织和各种包埋的切片均可使用，只是对不同包埋的切片法处理略有不同。下面简介石蜡包埋切片的HE染色法。

1、脱蜡：石蜡切片的组织内部充满石蜡，不能使水溶性染液着色，因此在染色前需要首先用二甲苯将石蜡脱掉，共两次。

2、下行入水：将已脱蜡的标本浸入无水酒精及各级酒精，使组织逐步接近水。3、蒸馏水略洗。

4、苏木素溶液染色约5—15分钟

5、自来水洗去多余染料。

6、入稀释的酒精溶液中分色，边分色边镜检，至核呈红紫色，细胞质无

色为合适。

7、分色后用自来水或加数滴碱化，直至细胞核变成蓝色。这一步骤也可称为“蓝化”。

8、入蒸馏水洗去碱性水分。

9、入百分之70酒精→百分之80酒精各5分钟。

10、入伊红染液染色30秒至数分钟。

11、以百分之95酒精对伊红分色，至胞浆，结缔组织等呈桃红色。

12、上行脱水：染色后的切片，因组织内含水而不透明，不能清晰地观察其微细结构。因此，须将组织内的水分经各级酒精→无水酒精逐步置换，进入不含水份的透明剂内。

13、透明：入二甲苯透明剂，二次（各数分钟）。